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    ELISA試驗溫育的時間與溫度選擇

           在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加酶結合物和顯色劑后??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育。

    1、溫育的時間選擇

    溫育這一步是ELISA測定中容易出現問題的步驟。目前國內ELISA試劑盒的反應溫育時間為37℃ 30分鐘-1小時,進口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1-2小時才能有較完全的結合,低于1小時,可能會影響測定下限。

    ELISA屬固相免 疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育。

    溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。

    2、溫育的溫度選擇

    溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。

    在建立ELISA方法作反應動力學研究時,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,產物的**可達頂峰。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度??乖贵w反應4℃更為徹底,在放射免 疫測定中多使反應在冰箱中過夜,以形成的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA中一般不予采用。

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