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  • 上海西格生物科技有限公司 主營:生化試劑,標準品,對照品,PCR試劑盒,?核酸檢測試劑盒,熒光定量檢測試劑盒,生化試劑盒?,比色法試劑盒,酶活性檢測試劑盒,ELISA試劑盒,酶聯免yi檢測試劑盒,試劑盒,ELISA試劑盒,抗體,重組蛋白,分光光度法檢測試劑盒,細胞株,原代細胞,細胞培養基,標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。
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    艱難梭菌(TCD-B)核酸檢測試劑盒反應引物要素解析

    PCR檢測試劑盒反應五要素:
    參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
    引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
    ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
    ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
    ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
    ④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
    ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第2個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
    ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
    ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
    引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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